Automuestreador
El automuestreador es el módulo de un sistema de cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC) encargado de introducir, de forma automática y reproducible, un volumen conocido de muestra en la corriente continua de fase móvil que la transporta hacia la columna.[1] Antes de que se generalizara su uso, esta función se realizaba con un inyector manual operado por el analista con una jeringa a través de una válvula de inyección; el automuestreador automatiza la misma operación mediante un brazo robótico y un dispositivo de medición (una jeringa o un émbolo motorizado) que aspira la muestra de un vial o pocillo y la introduce en esa misma válvula según una secuencia programada, lo que permite analizar series largas de muestras sin intervención continua del analista.[2] Esta página reúne los principios de funcionamiento y los parámetros del automuestreador que se citan de forma recurrente en las páginas de equipos de esta wiki; para las especificaciones del automuestreador de un instrumento concreto, véase la sección «Automuestreadores documentados en esta wiki» más abajo y la página del equipo correspondiente.
Mecanismo de inyección: la válvula de seis puertos
En prácticamente todos los automuestreadores documentados en esta wiki, la introducción de la muestra se controla con una válvula de inyección de seis puertos y dos posiciones de conmutación electrónica. En su posición de reposo —que Agilent llama «mainpass» (paso principal)—, la fase móvil circula de forma continua a través del bucle de muestra (sample loop), la aguja, el asiento de la aguja y el resto de los componentes en contacto con la muestra; este diseño de flujo continuo mantiene esos elementos constantemente enjuagados y reduce el arrastre de muestra entre inyecciones.[3] Al iniciar una secuencia de inyección, la válvula conmuta a la posición de derivación («bypass»), que dirige la fase móvil directamente hacia la columna sin pasar por el sistema de introducción de muestra; en esa posición, el dispositivo de medición aspira el volumen de muestra programado y lo introduce en el bucle.[3] Al concluir la secuencia, la válvula regresa a la posición principal y arrastra hacia la columna la muestra contenida en el bucle, lo que marca el inicio de la corrida en el sistema de datos cromatográficos.[3]
Según qué volumen de muestra se aspire respecto a la capacidad del bucle, y según el diseño específico del fabricante, la inyección puede realizarse de distintas formas:
- Por volumen total (full loop): se aspira un volumen igual o mayor a la capacidad del bucle, de modo que se inyecta la totalidad de su contenido; el volumen inyectado depende entonces del volumen exacto del bucle instalado, más que del volumen aspirado por la jeringa.
- Por bucle parcial (partial loop): se aspira solo el volumen que se desea inyectar, sin llenar por completo el bucle, lo que permite variar el volumen inyectado sin cambiar de bucle.
- Por bucle dividido (split loop): variante en la que se aspira un volumen mayor al que se desea inyectar y un dispositivo de medición retira el exceso antes de la inyección; Thermo Fisher Scientific describe esta estrategia, en su tecnología SmartInject, como una forma de mejorar la precisión de la inyección y de reducir los picos de presión transitorios al conmutar la válvula.[4]
- Con aguja de flujo continuo (Flow-Through Needle, FTN): en lugar de un bucle externo fijo, la propia aguja forma parte de la ruta de flujo durante la inyección; Waters usa este diseño en el automuestreador de aguja de flujo continuo (Sample Manager, FTN) de sus sistemas ACQUITY UPLC, con inyección directa desde la aguja.[5]
Parámetros de desempeño
Las especificaciones que distinguen a un automuestreador de otro, y que se citan en las páginas de equipos de esta wiki, incluyen:
- Volumen de inyección: el intervalo de volúmenes que el automuestreador puede introducir de forma reproducible con el bucle estándar, ampliable con bucles o cabezales opcionales.
- Arrastre de muestra (carryover): la fracción de una muestra que permanece en el sistema de inyección —la superficie externa e interna de la aguja, el asiento de la aguja, el bucle o la válvula— y puede contaminar la inyección siguiente.[2] Varios parámetros de la lista siguiente contribuyen a él, y se cita casi siempre frente a un compuesto de prueba concreto (cafeína o clorhexidina son los más comunes en las páginas de esta wiki), por lo que cifras obtenidas con compuestos distintos no son directamente comparables sin conocer las condiciones completas del ensayo.
- Tiempo de ciclo de inyección: el tiempo que transcurre entre el fin de una inyección y el inicio de la siguiente; puede acortarse superponiendo el lavado y la preparación de la siguiente muestra con la corrida en curso (inyecciones solapadas).[2]
- Capacidad de muestras: el número de viales, microplacas u otros contenedores que el automuestreador puede alojar sin intervención del analista.
- Control térmico de las muestras: un termostato opcional o integrado que mantiene la bandeja de muestras dentro de un intervalo de temperatura definido, relevante para muestras termolábiles.
- Contribución al volumen de retardo: el automuestreador forma parte de la ruta hidráulica entre la bomba y la columna, por lo que el volumen de su bucle, su aguja y su asiento se suman al volumen de retardo total del sistema.
Tecnologías para reducir el arrastre de muestra
El lavado externo de la aguja con un disolvente adecuado entre inyecciones es la estrategia más extendida para reducir el arrastre de muestra; en su forma más simple, la aguja se sumerge brevemente en un vial de disolvente antes de la siguiente inyección.[2] Agilent ofrece una versión ampliada de esta idea con la función Multiwash de sus automuestreadores Multisampler: el lavado externo de la aguja con hasta tres disolventes distintos, más un retrolavado del asiento de inyección, que según el fabricante reduce el arrastre de muestra de menos de 30 ppm (0.003 %) en la configuración estándar a menos de 9 ppm (0.0009 %), este último valor evaluado con clorhexidina como compuesto de prueba.[3] Thermo Fisher Scientific asocia a su tecnología SmartInject el mismo objetivo de minimizar el arrastre y, adicionalmente, reducir los picos de presión transitorios que se producen al conmutar la válvula de inyección.[4]
Contribución a la transferencia de métodos
Cuando un método se transfiere de un equipo a otro, el volumen de retardo que aporta el automuestreador —junto con el de la bomba— puede alterar los tiempos de retención si no se ajusta. Como caso documentado en esta wiki, Thermo Fisher Scientific ofrece en el automuestreador Split Sampler del Vanquish Core la posibilidad de ajustar libremente su contribución al volumen de retardo del sistema, entre 0 y 230 µL según la ficha del fabricante, sin necesidad de volver a tender la tubería del equipo.[4] Agilent, por su parte, documenta en el Hybrid Multisampler un modo de inyección adicional (Feed Injection) orientado a mitigar efectos de disolvente-muestra —arrastre incompleto (breakthrough), sobrecarga o precipitación— en muestras con alto contenido de disolvente orgánico, una situación que puede presentarse al transferir un método entre plataformas con disolventes de inyección distintos.[6]
Cumplimiento normativo
Como con el resto de los componentes documentados en esta wiki, ni el capítulo 621 de la USP ni el MGA 0241 (FEUM) – Cromatografía exigen que el automuestreador de un sistema tenga una marca, un modelo o un volumen de inyección determinados; ambos documentos evalúan la aptitud del sistema completo frente a los parámetros del método —como la resolución, el factor de coleo o la precisión de la respuesta del detector—, no las especificaciones de un módulo individual.
Automuestreadores documentados en esta wiki
La siguiente tabla reúne el automuestreador de cada equipo documentado en esta wiki. Los valores se tomaron de las páginas ya corregidas y verificadas de cada equipo (no se investigaron datos nuevos para esta tabla); para el detalle completo, la fuente original y las condiciones de cada especificación, véase la página del equipo correspondiente.
| Equipo | Automuestreador | Mecanismo de inyección | Volumen de inyección | Arrastre de muestra | Capacidad de muestras |
|---|---|---|---|---|---|
| Agilent 1100 Series | G1313A (estándar), G1329A (termostatada) o G1389A (microescala termostatada) | Por volumen total | 0.1 – 100 µL (ampliable a 1500 µL con bucle externo) | Típico < 0.1 %; < 0.05 % con lavado externo de aguja | 100 viales de 2 mL; variantes de media bandeja para 40 de 2 mL o 15 de 6 mL |
| Agilent 1200 Series | Automuestreador de alto rendimiento G1367B, o G1367C ("SL", hasta 600 bar) | No especificado en la página del equipo | 0.1 – 100 µL en incrementos de 0.1 µL (ampliable a 1500 µL con kit de extracción múltiple) | Típico < 0.1 %; < 0.05 % con lavado externo de aguja | 2 microplacas + 10 viales de 2 mL (variantes: 108 viales de 2 mL, 30 de 6 mL, o 54 tubos Eppendorf) |
| Agilent 1220 Infinity II LC System | Automuestreador integrado (sin número de parte independiente en la página del equipo) | No especificado en la página del equipo | 0.1 – 100 µL en incrementos de 0.1 µL; hasta 1500 µL con extracción múltiple (requiere modificar el hardware) | Típico < 0.1 %; < 0.05 % con limpieza externa de la aguja | 100 viales de 2 mL; bandejas de media capacidad para 40 de 2 mL o 15 de 6 mL |
| Agilent 1260 Infinity II Prime LC | Multisampler (G7167A) · Hybrid Multisampler (G7167C) · Vialsampler (G7129C) | No especificado en la página del equipo | 0.1 – 100 µL en incrementos de 0.1 µL (aguja única); hasta 900 µL con doble aguja | < 30 ppm (0.003 %) estándar o doble aguja; < 9 ppm (0.0009 %) con Multiwash | Hasta 6144 muestras (16 microplacas de pocillos poco profundos) |
| Agilent 1290 Infinity II LC | Multisampler (G7167B) · Hybrid Multisampler (G7137B) · Vialsampler (G7129B) | No especificado en la página del equipo | 0.1 – 20 µL de fábrica (aguja única); 40 o 100 µL con cabezal opcional; hasta 500 o 1500 µL con kits de mayor volumen | < 30 ppm (0.003 %) estándar o doble aguja; < 9 ppm (0.0009 %) con Multiwash | Hasta 6144 muestras (16 microplacas de pocillos poco profundos) |
| Waters ACQUITY UPLC H-Class PLUS System | Automuestreador de aguja de flujo continuo (Sample Manager, FTN) | Aguja de flujo continuo (FTN) | 0.1 – 10.0 µL de forma estándar; ampliable a 1000 µL con bucles de extensión opcionales | ≤ 0.002 % (cafeína, UV; sulfadimetoxina, MS) | 768 posiciones en dos microplacas de 384 pocillos, o 96 viales de 2 mL (hasta 7296 muestras con Sample Organizer opcional) |
| Waters Alliance e2695 Separations Module | Automuestreador de carruseles (sin nombre comercial distinto en la página del equipo) | Carrusel de viales (mecanismo de válvula no especificado en la página) | 0.1 – 100.0 µL de forma estándar; ampliable a 2000.0 µL con bucle de muestra opcional | ≤ 0.0025 % (cafeína) | 120 viales de 2 mL, en 5 carruseles de 24 viales cada uno |
| Shimadzu Prominence-i LC-2030C Plus | Automuestreador integrado (sin número de parte independiente en la página del equipo) | Por volumen total | 0.1 – 100 µL (variantes opcionales: 0.1 – 50 µL, 1 – 500 µL, 1 – 2000 µL) | 0.0025 % (cafeína) | 336 viales de 1 mL, 216 de 1.5 mL, 112 de 4 mL, o 4 microplacas |
| Thermo Scientific Vanquish Core HPLC System | Split Sampler C, o Split Sampler CT en su variante termostatada | Bucle dividido (split loop) con SmartInject | 0.01 – 100 µL de forma estándar; ampliable a 1000 µL de forma opcional | < 0.002 % (cafeína, UV); típicamente < 0.0004 % | 4 bandejas de 54 viales de hasta 1.5 mL, más 12 viales de hasta 10 mL en el carrusel (ampliable con el módulo opcional Vanquish Charger) |
* El Waters ACQUITY UPLC I-Class PLUS se menciona en otras páginas de esta wiki, pero su propia ficha todavía no está disponible entre los documentos revisados para esta comparación, así que no se incluyó aquí para no reproducir datos sin verificar; puede agregarse cuando esa página exista y esté verificada.
Véase también
- Bomba de HPLC
- Válvula de inyección
- Arrastre de muestra
- Volumen de retardo
- Aptitud del sistema
- Transferencia de métodos
- Columna cromatográfica
- Cromatografía de líquidos de alta resolución
- USP Capítulo General 621 (Cromatografía)
- MGA 0241 (FEUM) – Cromatografía
- Instrumentación HPLC en la UNAM
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Referencias
- ↑ Waters Corporation. ¿Cómo funciona la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC)?. Guía de iniciación a la cromatografía líquida, manuales básicos de Waters. Consultado el 26 de septiembre de 2026.
- ↑ 2,0 2,1 2,2 2,3 Agilent Technologies. Agilent 1100 Series Standard, Micro and Preparative Autosamplers — Reference Manual, documento G1313-90004, edición 08/01 (documento oficial de Agilent alojado por GMI, Inc.). PDF. Consultado el 26 de septiembre de 2026.
- ↑ 3,0 3,1 3,2 3,3 Agilent Technologies. Agilent InfinityLab LC Series Multisamplers — User Manual, documento SD-29000238 Rev. K.02, edición 06/2026 (el documento indica que su contenido también aplica a los módulos de la serie 1260/1290 Infinity II). PDF. Consultado el 26 de septiembre de 2026.
- ↑ 4,0 4,1 4,2 Thermo Fisher Scientific. Vanquish Split Samplers — Product Specifications, documento PS73319-EN0926. PDF. Consultado el 26 de septiembre de 2026.
- ↑ Waters Corporation. ACQUITY UPLC H-Class PLUS System. Página oficial del producto. Consultado el 26 de septiembre de 2026.
- ↑ Agilent Technologies. Hybrid Multisampler Series. Página oficial del producto. Consultado el 26 de septiembre de 2026.